дрозофила Диссекция добавочной железы у мужчин: метод выделения вторичных клеток

- Под диссекционным микроскопом и в средах, дополненных сывороткой, удалите репродуктивный тракт у каждой мухи с помощью щипцов. Во-первых, удалите части пищеварительного тракта, которые могли сопровождать репродуктивный тракт. Чтобы изолировать добавочные железы и семявыводящий проток, удалите яички, эякуляторную луковицу и терминалии. Промойте салфетку в течение одной-двух минут в PBS, чтобы удалить сыворотку. Затем перенесите его в раствор диссоциации.

Чтобы подвергнуть клетки внутри желез воздействию диссоциативного раствора, удерживайте центр каждой железы щипцами и разрежьте железу парой острых щипцов. Удалите проксимальную часть железы и семявыводящий проток, чтобы оставить позади дистальный конец железы, содержащий редкую вторичную популяцию клеток, ответственную за секрецию белков, участвующих в спаривании. Наконец, перенесите наконечники дополнительных желез в микроцентрифужную пробирку для подготовки к сбраживанию. В следующем протоколе мы препарируем добавочные железы для выделения вторичных клеток для анализа транскриптома.

- Перед началом процедуры разрежьте и обжарьте круглые широкие 200 микролитровые наконечники для работы с железами и пропустите отверстие нескольки