Рассечение мальпигиевых канальцев у взрослой мухи: выделение осморегуляторного и выделительного органа

- Начните с взрослой мухи под наркозом в посуде для препарирования. Держите муху за грудную клетку щипцами и вскройте задний конец брюшной полости с помощью второй пары щипцов. Поскольку взрослые мухи имеют две пары мальпигиевых канальцев или МТ, которые сходятся в кишечнике через общие мочеточники, вытягивайте заднюю кишку из мухи, чтобы высвободить МТ. Задняя пара МТ будет освобождена первой, когда они обернутся за кишечником. Продолжайте тянуть кишку, чтобы освободить передние МТ, а затем сожмите их в мочеточнике, чтобы отделить от мухи.

Чтобы закрепить канальцы, вставьте стеклянный стержень под мочеточник и перенесите МТ на предметное стекло, покрытое поли-L-лизином. Прикрепите рассеченные органы, надавливая на мочеточник, а затем осторожно проведите стержнем по МТ. Поли-L-лизин на предметном стекле будет способствовать прикреплению за счет увеличения числа положительно заряженных участков, доступных для связывания отрицательно заряженных клеток канальцев. В следующем протоколе мы препарируем МТ у взрослой самки мухи и установим их для визуализации ex vivo в реальном времени в системе перфузии.

- Чтобы начать эту процедуру, установите два комплекта зажимов для рук для пайки на