Островной анализ: высокопроизводительный метод оценки локомоторного поведения дрозофилы

- Островной анализ состоит из приподнятой белой платформы в поддоне с мыльной водой, накрытой прозрачной коробкой с одной открытой стороной. Камера в верхней части ящика записывает изображения платформы сверху, а светильники размещаются для обеспечения равномерного освещения территории.

Чтобы загрузить мух на арену, постучите флаконом по плоской поверхности, чтобы спустить всех мух на дно. В быстрой последовательности выньте пробку флакона, переверните флакон и постучите по открытому концу флакона о платформу, чтобы выбить всех мух одновременно. Приземление на платформу вызывает реакцию бегства. Мухи с типичной подвижностью могут преодолеть платформу за несколько секунд, в отличие от мух с дефектами опорно-двигательного аппарата.

Объекты прикованы к коробке, а те, кто приземляется на мыльную воду, быстро погружаются в воду, потому что мыло снижает поверхностное натяжение воды. Чтобы оценить локомоторное поведение в различных условиях, подсчитайте количество оставшихся мух на платформе через определенный период времени.

В этом примере протокола мы увидим настройку островного анализа, совместимую с полуавтоматическим анализом изображений.

- Во-первых, приготовьте не менее трех флаконов в каждом экспериментальном состоянии в качестве биологических реплик. В каждом флаконе должно быть примерно 15 мух одного пола и одинакового возраста. Важно, чтобы у мух были неповрежденные крылья.

Создайте папки для хранения экспериментов. Сгенерируйте их в структуре каталогов, определенной условиями, и реплицируйте. Если, например, в эксперименте есть два генотипа по пять репликаций в каждом, то создайте основную папку с датой эксперимента, а внутри этой папки создайте по одной подпапке для каждого генотипа. Затем в папках генотипа создайте подпапки для каждой репликации.

Далее настройте испытательный аппарат. Добавьте в ванну холодную воду с небольшим количеством мыла и расположите платформу посередине ванны, если она еще не закреплена в ванне. Накройте лоток и платформу прозрачным ящиком.

Чтобы осветить платформу, расположите над ней прохладную лампу, например, обычные 12-вольтовые светодиоды. Кроме того, расположите веб-камеру, подключенную к компьютеру, прямо над платформой.

На компьютере откройте программу для записи изображений. В системе меню выберите соответствующую веб-камеру в качестве устройства захвата. Поместите мертвую муху на остров, чтобы отрегулировать параметры видео. Настройте яркость, контрастность и цвет в программном обеспечении так, чтобы мертвая муха выглядела черной на белом фоне.

Затем отрегулируйте настройку видеоролика с интервальной съемкой, чтобы сохранить фильмы в виде файлов AVI. Затем перейдите в каталог, где должны быть сохранены данные, и определите название фильма. Сохраните эти изменения.

Для сжатия данных изображения выберите код Intel IYUV. Установите скорость записи на один кадр каждые 0,1 секунды и отрегулируйте соответствующую скорость воспроизведения на 10 изображений в секунду.

Наконец, перейдите в настройку «Дополнительно» и выберите «Создать изображение BNP» для каждого захваченного кадра. Затем перейдите в тот же каталог, который вы выбрали для размещения файлов AVI, и нажмите OK.

Прежде чем начать, убедитесь, что остров пуст и чист. Затем запустите запись в интерфейсе покадровой съемки программного обеспечения для записи изображений.

Возьмите флакон с мухами и постучите по нему два или три раза, чтобы сбить всех мух на дно. Затем быстро выньте пробку из флакона и энергично постучите мух по платформе. Все они должны попасть на платформу примерно в одно и то же время.

Дайте мухам до 30 секунд, чтобы покинуть платформу. Затем остановите запись. При необходимости вручную удалите остатки мух с платформы.

Прежде чем переходить к следующему эксперименту, обязательно переопределите каталог, в котором будет храниться следующий набор данных.