JoVE Encyclopedia of Experiments
Биология
0 просмотров • 3:28 мин • April 30th, 2023
- Начните с совместного содержания определенного количества самцов и самок плодовых мушек Drosophila melanogaster во флаконе, содержащем среду из кукурузной муки. Это позволяет обеспечить постоянную плотность потомства.
Позвольте самкам мух отложить яйца. Затем удалите взрослых мух. Яйца становятся личинками, куколками и, наконец, взрослыми мухами в течение 10 дней. Новые мухи, появившиеся раньше, чем их когорта, должны быть удалены до 9-го дня. Разделите теперь уже синхронизированных мух на группы для контрольных и экспериментальных условий. Кохаузинг самцов и самок мух позволяет спариваться, устраняя переменную, влияющую на продолжительность жизни.
Через несколько дней разделите мух по половому признаку на группы. Поместите равное количество мух в соответствующее экспериментальное состояние. Каждые три дня перекладывайте живых мух в новый флакон и записывайте количество мертвых мух. Повторяйте этот процесс до тех пор, пока все мухи не умрут.
После как минимум трех повторных экспериментов постройте график среднего процента выживших мух по дням, чтобы построить кривые средней выживаемости для каждого условия. В этом примере мы увидим, как построить кривые выживаемости для когорт, получавших химические вещества, разрушающие эндокринную систему.
- В протоколе продолжительности жизни сначала установите 20 флаконов с восемью самками и четырьмя самцами, каждый из которых наполнен 10 миллилитрами корма из кукурузной муки, и разместите их при температуре 25 градусов по Цельсию. Через четыре дня выбросьте мух и поместите флаконы обратно в инкубатор. Ближе к вечеру 9-го дня удалите всех вновь появившихся мух из флаконов и верните флаконы в инкубатор.
Через 16-24 часа разделите по 250 однодневных взрослых мух обоего пола на четыре группы под легким обезболиванием углекислым газом и переложите их в 250-миллилитровые флаконы, содержащие корм для взрослых особей, три с добавкой различных концентраций EDC, и одну с растворителем EE2. Поддерживайте температуру мух при температуре 25 градусов по Цельсию в течение двух-трех дней, чтобы они могли спариваться. Затем отсортируйте каждую когорту мух по полу на две группы. В рамках каждого условия лечения для обоих полов случайным образом разделите каждую группу на пять параллельных флаконов с плотностью 20 особей во флаконе. Подготовьте таблицу продолжительности жизни, в которой количество мертвых мух вычитается из числа выживших мух от предыдущего переноса, чтобы количество выживших при каждом переносе получалось автоматически.
Через три дня перенесите мух без анестезии в новые флаконы, содержащие соответствующую пищу в то же время, и проверьте на смерть. Запишите возраст мух и количество погибших мух. Повторяйте пересадку каждые три дня, пока все мухи не умрут.