Монтирование мозга взрослой дрозофилы: метод подготовки слайдов для конфокальной визуализации

- На положительно заряженном предметном стекле микроскопа прикрепите два защитных стекла с достаточным расстоянием между ними, чтобы создать пространство для установки мозга дрозофилы. Под стереомикроскопом наведите пипетки мозга в монтажной среде в это пространство. Отрицательный заряд ткани поможет мозгу прилипнуть к положительному заряду на поверхности предметного стекла.

Удалите излишки монтажной среды, чтобы обеспечить точное позиционирование мозга на предметном стекле в виде сетки с помощью антенных лепестков вверх, затем соедините два покровных стекла, приклеив третью защитную планку, чтобы закрыть мозг.

Чтобы заполнить полость, помещайте монтажную среду по одной капле в край полости и дайте ей распространиться капиллярным движением, чтобы она не беспокоила мозг.

Заклейте полость лаком для ногтей и храните при температуре минус 20 градусов Цельсия в темноте, чтобы сохранить флуоресценцию окрашенных тканей.

В примере протокола мы смонтируем мозг дрозофилы для конфокальной визуализации иммуноокрашенных нейронов.

- Чтобы закрепить мозги, соорудите горку-мостик. Нижняя крышка в положении два скользит примерно на один сантиметр друг от друга на положительно заряженном затворе. Убедитесь, что положительно заряженная сторона лежит лицевой стороной вверх. Затем приклейте покровные листы к предметному стеклу лаком для ногтей и дайте лаку полностью высохнуть, прежде чем продолжить.

Далее поместите предметное стекло под стереомикроскоп и пипеткой проведите мозги в среде в пространство между покровными стеклами. Обязательно отрегулируйте освещение для улучшения визуализации мозга.

Затем откачайте дополнительную монтажную среду от предметного стекла, стараясь не задеть мозги. Затем отвлеките остатки излишков монтажного материала. Это позволит более точно расположить мозги. Теперь с помощью щипцов сориентируйте мозг в виде сетки так, чтобы его доли усиков были обращены вверх.

Затем наденьте защитный лист на мозги и с помощью лака для ногтей запечатайте края верхнего покровного листка, которые прикреплены к базовым покровным листам.

Теперь нагрузите центральную полость свежим монтажным материалом по каплям, позволяя фильтрующему материалу втягиваться под защитное стекло капиллярным действием. Когда полость будет заполнена, полностью запечатайте ее прозрачным лаком для ногтей.