Микроинъекции клеток-кормилиц дрозофилы: метод внутриклеточной доставки

- Положите на предметный столик микроскопа покровную крышку с препарированными яйцевыми камерами. Найдите яйцевую камеру соответствующей стадии развития и ориентации для микроинъекции. Яйцевые камеры средней и поздней стадии имеют большой видимый желток ооцитов, а те, которые находятся в правильной ориентации, расположены передней и задней осью перпендикулярно направлению инъекции.

Нервные клетки дрозофилы представляют собой группу из 15 клеток внутри яйцевой камеры, отвечающих за депонирование питательных веществ и биомолекул, полученных от матери, в развивающийся ооцит. Настройте систему микроинжекторов на соответствующее давление впрыска и компенсации, чтобы обеспечить постоянный объем впрыска и исходящий поток. Осторожно выведите предварительно нагруженную капиллярную иглу в поле зрения так, чтобы клетки и игла оказались в одной фокальной плоскости.

Убедитесь, что в кончике капилляра нет воздуха, застрявшего в кончике капилляра, и что поток раствора идет непрерывно. Затем отрегулируйте Z-положение объектива, чтобы сфокусироваться на мембране, отделяющей клетки фолликула от клеток медсестры, введите иглу в клетку медсестры и выполните инъекцию.

Следующий протокол демонстрирует м