Встраивание голов взрослых дрозофил в парафин: подготовка тканей к гистологии

- Чтобы обездвижить мух для введения парафина, осторожно протолкните дрозофилу под наркозом через щель ошейника от мух, чтобы их головы были равномерно расположены на верхней части устройства, в то время как они все еще прикреплены к остальной части тела. Для фиксации тканей поместите воротники в раствор Карнуа. Карной представляет собой денатурирующий фиксирующий агент, состоящий из этанола, хлороформа и уксусной кислоты.

Чтобы подготовить образец к инфильтрации парафина, обезвоживайте ткань, пропуская воротник через дифференцированные концентрации этанола. Затем переведите воротник в метилбензоат, органический растворитель. Затем поместите его в раствор метилбенозоата и расплавленного парафина, пока он нагревается, чтобы парафин оставался расплавленным. Перейдите к сложной серии этапов стирки с предварительно нагретым парафином, чтобы удалить метилбензоат.

Далее быстро поместите воротник в форму и залейте расплавленным парафином, чтобы покрыть его полностью. Как только парафин застынет, извлеките блок из формы и с помощью лезвия бритвы обрезайте излишки парафина. Обломайте воротник, оставив ряд заделанных головок в парафиновом блоке. В примере протокола мы увидим процедуру, проде