Анализ CApillary FEeder (CAFE): метод отслеживания потребления и предпочтений пищи у дрозофил

- Чтобы подготовиться к тесту с капиллярным питателем или CAFE, вставьте градуированные или маркированные стеклянные капилляры, заполненные цветной жидкой пищей, нижним концом вперед, через наконечники пипетки в верхней части предварительно собранного экспериментального флакона. Убедитесь, что капилляры надежно расположены на одной высоте и не соприкасаются с аппаратом.

Отметьте начальный уровень мениска в каждом капилоле. Затем поместите флаконы в среду с контролируемой температурой, влажностью и светом на протяжении всего эксперимента, заменяя капилляры по мере необходимости. Во время анализа CAFE подвижные мухи не сдерживаются и имеют свободный доступ к нижнему открытому концу микропипетки. Мухи питаются произвольно, удлиняя свой хоботок и всасывая жидкость, уменьшая содержание среды внутри капилляра.

Чтобы отслеживать потребление пищи и предпочтения в течение определенного периода времени, запишите спуск мениска от начальной отметки до уровня в конце этого периода от квалификационных капилляров. В примере протокола мы увидим анализ CAFE со сборкой, модифицированной для достижения уменьшения испарения из заполненных жидкостью капилляров.

- Осторожно извлеките наконечник пипетки, закрывающий одно из внешних отверстий, и вставьте заполненный стеклянный капилляр нижним концом вперед. Закрепите капилляр, поместив наконечник пипетки обратно рядом с капилляром. Повторите этот шаг для всех протестированных пищевых решений.

Далее поместите концы капилляров внутрь всех флаконов на одном уровне, в 3-4 сантиметрах от крышки. Оставьте некоторое расстояние между фильтровальной бумагой, чтобы предотвратить протекание капилляра. С помощью маркера пометьте верхний конец цветной жидкости. Пометьте их по отдельности с помощью кода полосы, чтобы можно было идентифицировать различные капилляры.

Подготовленные пробы CAFE поместите в пластиковую коробку с сетчатой вкладышем. С помощью губки наносите 100 микролитров свежей воды каждые 24 часа, чтобы поддерживать постоянную влажность внутри анализа. Используйте четыре отдельных флакона, наполненных 30 миллилитрами дважды дистиллированной H2O в качестве устройств для измерения влажности, и поместите их рядом с тестами CAFE в пластиковой коробке.

Накройте пластиковый ящик, чтобы создать среду с контролируемой влажностью во время эксперимента. Перенесите бокс в безопасное положение в климатической камере с регулируемой температурой, светом и влажностью на период эксперимента. Перед каждым 24-часовым интервалом записывайте мертвых мух и используйте количество живых мух для расчета потребления на одну муху за следующий период.

В конце анализа и перед заменой капилляра держите анализ CAFE в вертикальном положении. Не снимайте крышку, а отметьте нижний мениск капилляра. Отбраковывайте данные, если конец метки находится не ниже начальной отметки. Заменяйте использованные капилляры свеженаполненными для длительных экспериментов каждые 24 часа.

Измерьте уменьшение мениска. Затем откажитесь от старых капилляров. Затем аккуратно извлеките капилляры из анализа, и сохраните их для сбора данных. Проверьте, достигла ли жидкость внутри капилляра нижнего конца. Если жидкость внутри капилляра не достигла нижнего конца, откажитесь от данных.

После эксперимента разберите установку, а флаконы, крышки и губки вымойте в мыльной ванне. Затем высушите их на ночь при комнатной температуре для дальнейшего использования. Повторите эксперименты с одними и теми же генотипами по крайней мере в три разных дня. С помощью штангенциркуля измерьте расстояние между началом и концом метки на капилляре. Наконец, выбросьте капилляры после измерения.