Подготовка филе личинок: метод визуализации интактных сенсорных нейронов и ассоциированных клеток эпидермиса

- Чтобы сориентировать личинку для вскрытия филе, поместите ее в посуду с силиконовым покрытием, содержащую холодный физиологический раствор, и определите ее спинную и брюшную стороны. Трахейные трубки, проходящие по его длине, обозначают дорсальную сторону, в то время как брюшные зубчатые пояса определяют вентральную сторону.

Затем брюшной стороной вверх аккуратно растяните личинку и приколите каждый конец к дну посуды. Такое положение позволит сохранить дорсальные кластеры сенсорных мультидендритных нейронов и связанные с ними эпидермальные клетки нетронутыми по мере вскрытия.

С помощью препарирующих ножниц разрежьте вдоль вентральной средней линии личинки. Приколите кутикулу к пластине, чтобы сделать препарат более плоским, и удалите внутренние структуры, чтобы выявить подлежащую мышечную ткань. Затем осторожно удалите соответствующую мышцу, чтобы обнажить эпидермис и получить доступ к ранее скрытым нейронам, сохраняя при этом их дендритную морфологию.

В примере протокола мы увидим подробную демонстрацию подготовки филе личинок и удаления мышц для просмотра сенсорных нейронов и эпидермальных клеток.

- Для начала добавьте достаточно холодного солевого раствора в форму с силиконов