дрозофила Сбор яиц и дехорионация: метод удаления внешнего слоя яиц

- Дайте дрозофиле отложить яйца на ночь на блюдо, содержащее агар с добавлением виноградного сока для визуализации яиц и покрытое дрожжами, чтобы стимулировать мух к спариванию и откладыванию яиц. Чтобы удалить яйца, добавьте в блюдо дистиллированную воду и аккуратно протрите поверхность кистью. Затем вылейте смесь через капроновую сетку, помещенную в пластиковую втулку для сбора икры. Замочите яйца в двух кругах 7% отбеливателя, чтобы удалить хорион, или защитный внешний слой, с эмбриона. Этот процесс называется дехорионацией.

Теперь яйца прилипают к боковой части втулки. Промойте их три раза водой, чтобы удалить отбеливатель. Наконец, с помощью кисти перенесите яйца из втулки во флаконы для продолжения разработки или для немедленного использования в эксперименте. В примере протокола мы будем собирать и дехорионировать яйца дрозофилы в стерильных условиях для выращивания мух с определенной микробиотой.

- Поместите капроновую сетку в пластиковую втулку, чтобы подготовить сито к сбору яиц. Если те же мухи будут использоваться и на следующий день, немедленно пересадите их в новую клетку, содержащую свежедрожжевой виноградный сок из агаровых пластин. Пластина с виноградным соком в предыдущей клетке содержит яйца плодовой мухи. Удалите мертвых мух чистой кистью и будьте осторожны, чтобы не разбить агар. Промойте пластину с агаром дистиллированной водой и аккуратно смахните яйца с поверхности агара, затем полейте сетку суспензией, чтобы собрать яйца.

Простерилизуйте шкаф биобезопасности с помощью 70% этанола, затем включите ультрафиолетовый свет. Опрыскайте все небиологические материалы 70% этанолом и немедленно поместите их в шкаф для биологической безопасности, затем простерилизуйте их ультрафиолетовым излучением.

- Крайне важно обеспечить надлежащую асептическую технику при работе внутри шкафа биобезопасности или при добавлении или удалении новых материалов.

- Переложите втулку с яйцами в чашку для образцов объемом 120 миллилитров и медленно налейте 90 миллилитров 0,6% раствора гипохлорита натрия или 7% отбеливателя во втулку, чуть ниже обода. С помощью щипцов периодически перемещайте втулку вверх и вниз в растворе для ресуспензии яиц. Перенесите втулку непосредственно во вторую чашку для образцов, предварительно заполненную 90 миллилитровыми отбеливателями.

По окончании второй обработки хлорной известью яйца должны начать прилипать к бокам куста. Выбросьте отбеливатель и полностью промойте втулку стерильной водой. Опять же, используйте щипцы, чтобы подвешивать яйцо несколько раз во время каждого мытья. К концу третьей промывки большинство яиц должно быть прикреплено к боковой части втулки.

С помощью стерильной кисти переведите яйца со стороны втулки на стерильный рацион. Оставьте колпачки свободными, чтобы кислород мог проникнуть в трубку. Перенесенные яйца будут видны на поверхности рациона.