Выслеживание свободно гуляющих мух: метод оценки локомоции дрозофилы

- Используйте крытую арену, например, чашку Петри, наполненную прозрачным силиконом, чтобы мухи могли свободно ходить, но не могли залетать внутрь арены, когда она покрыта. Поставьте блюдо на белую освещенную поверхность и расположите камеру прямо над ней.

Открыв крышку, перенесите обезболивающих мух в тарелку, накройте ее и дайте субъектам восстановиться. Мухи будут свободно перемещаться по арене во время испытания. Чтобы оценить передвижение, отслеживайте положение каждой мухи с течением времени и вычисляйте параметры, характеризующие передвижение, такие как расстояние, пройденное каждой мухой. В этом примере протокола мы увидим демонстрацию настройки и анализа анализа с помощью программного обеспечения для видеослежения.

- Чтобы отслеживать движения мухи в чашке Петри, сначала заполните 6-сантиметровую чашку прозрачным силиконовым эластомером, чтобы сделать арену для слежения. Оставьте зазор в 3 миллиметра между силиконом и крышкой, чтобы мухи могли свободно ходить в щели, но не взлетать. Под ареной слежения располагайте белый фон.

Далее обезболите четырех мух из той же группы лечения и поместите их в арену. Дайте мухам акклиматизироваться в течение часа к арене, которая должна быть полностью освещена и при температуре около 22 градусов по Цельсию, не выше комнатной температуры. Через час используйте камеру с зарядным устройством, расположенную над ареной, чтобы записывать активность мухи в течение 5 минут.

После 5-минутной записи обезболите мух на арене и верните их в новый домашний флакон. Затем утилизируйте арену. Позже проанализируйте записи с помощью бесплатного программного обеспечения Ctrax. Это программное обеспечение генерирует данные отслеживания, которые могут быть экспортированы в формате, совместимом с программируемым языком, например в формате MATLAB.

На основе этих данных вычислите расстояние, пройденное за кадр, среднее расстояние ходьбы для каждой мухи и среднее расстояние, пройденное за одну муху. Для статистической значимости следует ожидать тестирования около 100 мух в каждой группе лечения.