Механическое удаление мембраны хориона и вителлина: метод подготовки ооцитов дрозофилы к прямому наблюдению

- Начните со зрелых яйцеклеток из неподвижных яичников в физиологическом растворе. Зрелые ооциты несут яичную скорлупу, состоящую из наружного хориона и внутренней вителлиновой мембраны.

Чтобы механически удалить хорион и вителлиновую мембрану, поместите ооциты между матовыми частями двух предварительно обработанных предметных стекол. Перемещайте верхнюю горку прямыми движениями вперед-назад, чтобы создать трение, которое сворачивает ооциты.

Теперь переместите верхнюю горку под небольшим углом, чтобы свернуть ооциты в другом направлении. Избегая кругового движения, увеличивайте этот угол с короткими шагами, пока верхняя горка не переместится перпендикулярно нижнему слайду. Это движение механически удаляет хорионы и вителлиновые мембраны, обеспечивая доступ зондов или красителей к ооциту.

Ооциты без хорионов будут казаться длинными и тонкими, а без вителлиновых мембран будут иметь заостренные концы. Чтобы отделить очищенные ооциты от окружающего мусора, перенесите смесь образцов в пробирку и дайте ооцитам осесть на дно, в то время как мусор будет плавать наверху и может быть удален.

В этом протоколе мы удалим мембраны хориона и вителлина из зрелых ооцитов дрозофилы.

- Чтобы отделить