Энциклопедия экспериментов JoVE
Биология
0 просмотров • 2:52 мин. • April 30th, 2023
- Для начала закрепите куколку плодовой мушки спиной, или спиной, стороной вверх. Удалите оперкулум или передний конец куколки, чтобы обнажить голову животного. Продолжайте открывать куколку, разрезая и снимая оболочку. После освобождения накройте рассеченную куколку PBS, чтобы избежать высыхания. Сделайте чистый поперечный разрез через грудную клетку и удалите заднюю часть туши.
Чтобы обнажить комплекс глаз-мозг, который включает в себя две сетчатки, прикрепленные к зрительным долям, начните отрывать эпителий от разрезаемого края грудной клетки и продолжайте постепенно вскрывать капсулу головы. Затем осторожно направьте комплекс глаз-мозг в сторону от остатков капсулы головы.
В примере протокола мы увидим демонстрацию рассечения куколки, глаза-мозга, используемого для выделения ткани для различных последующих анализов.
- Поместив куколок дрозофилы на черную тарелку для препарирования, положите свежий кусок двустороннего скотча на чашку для препарирования подальше от куколок и с помощью щипцов осторожно положите куколки тыльной стороной вверх на ленту.
Поместите чашку под стереомикроскоп и с помощью щипцов удалите оперкулум каждой куколки. Используйте ножницы для микродиссекции, чтобы разрезать каждую куколку, позволяя развернуть ее, чтобы открыть головку, грудную клетку и передний брюшной сегмент, и закрепите края куколки на двусторонней ленте.
Острыми щипцами проткните брюшную полость каждой куколки и извлеките куколку из ее куколочного корпуса. Поместите куколку на чашку для вскрытия подальше от ленты и накройте ее 400 микролитрами ледяного PBS. Используйте щипцы, чтобы захватить каждый из них за живот, и с помощью ножниц для микродиссекции сделайте один чистый поперечный разрез через грудную клетку, разрезая куколки пополам.
С помощью двух пар тонких щипцов захватите разрезанные края эпителия каждой грудной клетки и постепенно вскрывайте грудную клетку и капсулу головки, обнажая комплекс глаз-мозг в окружающей жировой ткани. Затем, не захватывая ткань, с помощью щипцов направляйте каждый полупрозрачный, грязно-белый, гантелевидный комплекс глаз-мозг в сторону от остатков капсулы головы.