Замораживание нематод: метод обнажения внутренних тканей червей для окрашивания

- Перенесите вымытый C. elegans в жидкости на предметное стекло, предварительно покрытое полилизином — соединением, которое поможет червячной кутикуле прилипнуть к стеклянной поверхности. Аккуратно нажмите на другую стеклянную заслонку прямо вниз с краем, нависающим над нижней застежкой. Чтобы обездвижить червей без повреждений, сжимайте животных, избегая каких-либо боковых движений. Затем поместите стеклянные предметные стекла с заслоненными червячками на металлический блок внутри изолированного лабораторного контейнера, наполненного замораживающим веществом, таким как жидкий азот или сухой лед.

Металл является эффективным проводником температуры, гарантируя, что поверхность блока достаточно холодная, чтобы быстро заморозить кутикулу червя на обеих стеклянных поверхностях. После замораживания быстро разделите предметные стекла, чтобы раздвинуть или расколоть кутикулу червя. Приступайте к фиксации и окрашиванию тканей, так как нарушение кутикулы с низкой проницаемостью позволяет химическим фиксаторам и окрашивающим антителам получить доступ к внутренним тканям червя. В следующем протоколе мы увидим подробную демонстрацию техники замораживания-растрескивания и фиксации тканей.

- Для