Энциклопедия экспериментов JoVE
Биология
0 просмотров • 3:24 мин. • April 30th, 2023
- У C. elegans РНК-интерференция может быть индуцирована кормлением червей бактериями, экспрессирующими двухцепочечную РНК или дцРНК из рекомбинантной ДНК-плазмиды.
Для начала выращивайте устойчивый к тетрациклину HT115 E. coli, трансфицированный плазмидой L4440, в течение ночи на селективных агаровых планшетах LB, содержащих тетрациклин и ампициллин или его функциональный аналог карбенициллин. В дополнение к целевой ДНК, плазмида содержит ген устойчивости к ампициллину. Только колонии бактерий, которые наследуют плазмиду, могут расти в присутствии этих антибиотиков.
Далее соберите колонии бактерий и разложите их в жидкой среде LB до нужной концентрации. Чтобы вызвать экспрессию дцРНК, перенесите раствор бактерий на подготовленную среду для роста нематод, или NGM, агаровые пластины, содержащие IPTG.
В этой системе экспрессии ИПТГ имитирует лактозу, инактивируя лак-репрессор, обеспечивая экспрессию Т7-РНК-полимеразы. На плазмиде экспрессия целевой ДНК регулируется двумя сходящимися промоторами Т7. Следовательно, смысловые и антисмысловые последовательности транскрибируются, что приводит к экспрессии дцРНК.
Наконец, червь использует информацию о последовательностях из проглоченной дц
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео