Энциклопедия экспериментов JoVE
Биология
0 просмотров • 3:15 мин. • April 30th, 2023
- Для начала добавьте карбенициллин и один миллимолярный IPTG в контрольные и тестовые культивальные колбы, содержащие S-базальную среду. В течение нескольких минут вращайте трубку, содержащую личинки первой стадии роста, также называемые личинками L1. Теперь снимите надосадочную жидкость и положите два микролитра L1 на агаровую пластину. Поместите пластину под препарирующий микроскоп и подсчитайте количество личинок.
Добавьте РНК-интерференционные бактерии, несущие неспецифическую РНК-интерференциальную плазмиду, в контрольную колбу и бактерии с генно-нацеленной РНК-интерференцией в тестовую колбу. Количество добавляемых бактерий должно быть пропорционально количеству червей.
Дайте личинкам расти при непрерывном встряхивании, чтобы обеспечить надлежащее насыщение кислородом. Личинки питаются бактериями. Внутри личинки маленькая интерферирующая РНК связывается с комплементарной мРНК, продуцируемой целевым геном, и подавляет экспрессию белка. Наконец, исследуйте червей на предмет интересующего вас фенотипа.
В примере протокола мы будем обрабатывать личинки L1 РНК-интерференцией, нацеленной на ген daf-2, в жидкой культуре.
- Чтобы начать лечение, добавьте 207,45 мл базальной среды S
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео