дрозофила Y-образный лабиринт: метод оценки обонятельных реакций у мух

- Y-образный лабиринт состоит из Y-образного соединителя с тремя флаконами, соединенными с ним прямыми или коническими трубками. Мухи движутся по лабиринту в сторону с помощью стимула, который они предпочитают. Чтобы начать эксперимент, поместите в каждый флакон папиросную бумагу с раствором, содержащим летучие химические вещества. Затем соедините их с коническими трубками. Конические трубки ограничивают способность мух возвращаться в центр лабиринта и замедляют диффузию летучих химических веществ.

Затем охлаждайте изголодавшихся мух, чтобы замедлить их. Не используйте химическую анестезию, так как это может повлиять на исход анализа. Быстро соедините флакон с охлажденными мухами с конечной стороной лабиринта. Оставьте мух, чтобы исследовать лабиринт. Чтобы уменьшить любые предпочтения, вызванные ярким светом, выполняйте этот шаг под дальним красным светом, который мухи не видят. Наконец, посчитайте мух по обе стороны лабиринта. Их расположение в лабиринте указывает на то, что они предпочитают этот летучий химический запах.

В примере протокола мы увидим настройку анализа Y-лабиринта с диким типом дрозофилы.

- Перед проведением анализа на следующее утро, в конце дня, переведите когорты из 10-20 экспериментальных линий в стеклянные флаконы с влагой, полученной из влажного полотенца. Мухи должны быть проверены в течение 16-18 часов, иначе они могут умереть из-за высыхания или голода. На следующий день соберите Y-образный лабиринт. Начните с соединения Y-образного соединителя с двумя стеклянными флаконами с помощью пенопластовых соединителей с обрезанными наконечниками для пипеток, из которых образуются кабелепроводы. Их сужающаяся форма делает эти проходы односторонними.

Третья ветвь буквы «Y» прикреплена к загрузочной трубке, изготовленной из большой части наконечника для пипетки, и позволяет проходить от загрузочной пробирки к выбранной точке лабиринта. За каждым сужающимся туннелем находится стеклянный флакон, в один из которых необходимо загрузить одорант. Загрузите их в виде 40-микролитровых болюсов, пропитанных 28-миллиметровыми квадратами папиросной бумаги. Какой из двух содержит одорант, следует чередовать случайным образом.

Чтобы провести тест, сначала кратковременно охладите мух на льду, чтобы они замедлились. Это должно быть под дальним красным светом от светодиодных ламп и при температуре 25 градусов по Цельсию. Аккуратно опустите когорту мух в загрузочный флакон и загрузите Y-образный лабиринт тестовыми мухами. Не используйте газовую анестезию.

- Очень важно быстро и аккуратно переносить мухи в загрузочный флакон. На самом деле это самый сложный этап этого эксперимента, потому что мухи должны быстро проснуться до того, как запахи начнут распространяться в Y-образном лабиринте.

- Мухам следует позволить исследовать лабиринт в течение 24 часов, чтобы максимальное количество мух переместилось на тот или иной стеклянный флакон. Количество мух, присутствующих в различных трубках, служит для расчета обонятельного индекса. К этой величине следует применять стандартные статистические методы, полученные на основе поведения до 10 мух.

Если когорты из 10 мух не дают стабильных результатов, испытания можно провести с группами из 20 мух. Чтобы очистить компоненты лабиринта, замочите их, демонтированные, в RBS 35 MD на ночь. После этого следует полоскание в водопроводной воде и окончательное полоскание в деионизированной воде перед сушкой на воздухе.