Анализ световых пятен: метод исследования фототаксического поведения дрозофилы

- Начните с выбора личинки третьего возраста, самой крупной из личиночных форм, из питательной среды и промойте ее водой, чтобы удалить любую пищу. Поскольку личиночные глаза, или органы Болвига, расположены в верхней части передней части личинки, поместите личинку в центр агаровой пластины с источником света над животным. Выключите свет в комнате и дайте личинке акклиматизироваться к темноте.

Поскольку личинка едва заметна в световом пятне, созданном видимым светом, включите инфракрасные светодиодные лампы, чтобы осветить животное для камеры. Подождите, пока животное не начнет ползти прямо, чтобы контролировать свой путь. А затем повернуть пластину так, чтобы личинка поползла прямо к светящемуся пятну. Запишите, как животное выползает на свет, а затем удаляется от светового пятна. Эта тактика избегания света помогает личинкам избегать хищников, зарываясь в пищу.

В следующем примере мы проведем анализ световых пятен, чтобы проверить способность различных генетических штаммов личинок дрозофилы убегать от света.

- Прежде чем вводить личинку в установку визуализации, возьмите короткое видео положения источника света и назовите нефильтрованное фоновое видео «lightarea1». Установите фильтр обратно на объектив камеры и включите свет вдали от экспериментального устройства на как можно более низкой настройке, при этом позволяя четко наблюдать личинки. С помощью ложки удалите несколько личинок из питательной среды и аккуратно выберите личинку третьего возраста.

Промойте личинку в дистиллированной воде, и поместите личинку в центр агаровой пластины. Аккуратно удалите лишнюю воду из личинки и выключите свет в комнате. Дайте личинке акклиматизироваться в течение двух минут в темноте, прежде чем включать инфракрасный светодиодный свет. Следующий эксперимент по избеганию света необходимо проводить в темноте. Для удобства демонстрации мы снимали при ярком свете.

Аккуратно смажьте личинку щеткой к центру пластины. Когда личинка начнет ползать прямо, поверните пластину, чтобы личинка направилась в сторону светового пятна. Нажмите «Захват», «Настройка» и «Захват видео», чтобы выбрать путь сохранения. И нажмите «Начать запись» для записи. Дайте лаве подползти к светящемуся, войдите и покиньте световое пятно, пока оно не исчезнет из поля зрения, затем нажмите «Остановить запись».

Отодвиньте фильтр от камеры и снимите короткое видео положения светового пятна. Затем назовите пост как неотфильтрованное видео "lightarea2" и сравните это видео с видео "lightarea1", чтобы убедиться, что положение светового пятна не изменилось.