JoVE Encyclopedia of Experiments
Биология
0 просмотров • 2:38 мин • April 30th, 2023
- Подготовить личинки дрозофилы к анализу тепловым зондом, собрать животных нужной стадии развития и перенести отдельных личинок на тестовую пластину с тонкой пленкой воды. Вода позволяет личинкам свободно передвигаться, не прилипая к поверхности пластины.
Личинки дрозофил обнаруживают вредные тепловые стимулы через мультидендритные сенсорные нейроны в эпидермисе, известные как ноцицепторы. Они не срабатывают до тех пор, пока не будет достигнут определенный сенсорный порог, такой как потенциально опасные высокие температуры.
Установите тепловой зонд на температуру, которая превысит этот сенсорный порог и вызовет возбуждение ноцицепторов. Аккуратно прижмите кончик щупа к личинке, чтобы подать тепло. Личинка будет реагировать на вредную температуру термоноцицептивным поведением, отстраняясь от зонда. Остановитесь, когда личинка проявляет роль на 360 градусов вдали от теплового зонда или по истечении определенного времени. Запишите время отклика.
В примере протокола мы увидим демонстрацию локализованного анализа теплового зонда на личинках дрозофилы раннего третьего возраста.
- Во-первых, установите температуру термозонда до нужного заданного значения. С помощью кисти или щипцов аккуратно перенесите отдельную личинку на ровную платформу, следя за тем, чтобы лава была покрыта тонкой пленкой воды.
- Для того, чтобы свести к минимуму перепады давления, а также обеспечить правильное расположение и угол наклона теплового щупа, практика приводит к совершенству.
- Осторожно прижмите кончик зонда к личинке в точке сегмента А4, слегка надавливая кончиком под углом около 45 градусов между зондом и поверхностью личинки. Давление должно вызывать небольшое углубление на поверхности личинки и, как правило, будет достаточным для предотвращения передвижения. Продолжайте стимулировать личинку до тех пор, пока не проявится реакция отмены или пока не будет достигнут 20-секундный порог.
Реагирующие личинки обычно сначала демонстрируют предварительное поведение подъема головы и хвоста, за которым следует поведение отхода, когда они переворачиваются не менее чем на 360 градусов. Как только поведение вывода будет инициировано, прекратите контакт с зондом и запишите задержку или время, затраченное на вывод средств. Если в течение 20 секунд не наблюдается никакого поведения вывода, то личинка не реагирует.