Вскрытие средней кишки у взрослой мухи: метод выделения пищеварительного тракта

- Для начала удалите голову у взрослой мухи, находящейся под наркозом. Накройте обезглавленную муху раствором, содержащим фосфатно-солевой буфер (PBS) и бычий сывороточный альбумин (BSA), чтобы избежать высыхания. Держите муху за грудную клетку щипцами, а затем подтяните брюшную полость второй парой щипцов, чтобы обнажить кишечник. Поскольку урожай или мешок для хранения продуктов будет прикреплен к грудной клетке, осторожно оттяните кишечник от грудной клетки.

После отделения потяните урожай от брюшной полости, чтобы развернуть кишечник. Оттяните задний конец мухи, чтобы начать освобождать кишку от брюшной полости. Продолжайте тянуть кишечник, чтобы вытянуть всю ткань из брюшной полости. После освобождения удалите переднюю кишку, мальпигиевые канальцы, заднюю кишку и яичники, чтобы оставить только рассеченную среднюю кишку, основное место пищеварения у мухи.

В примере протокола мы будем препарировать средние кишки у молодых и старых взрослых мух для дальнейшего анализа с помощью сортировки флуоресцентно-активируемых клеток или FACS.

- Перед началом вскрытия обезболите один флакон из 40 мух углекислым газом на стандартной подстилке для мух. Затем с помощью лезвия бритвы обезглавьте