Анализ продолжительности жизни: измерение долголетия C. elegans

- Чтобы измерить среднюю продолжительность жизни популяции нематоды, начните с синхронизированных по развитию личинок L1 в буфере M9. Определите плотность личинок, затем прибавьте по 50 в каждую пластину. Подготовьте не менее трех репликационных пластин для каждого условия, а также резервные пластины.

Дайте этим червям нормально развиваться, пока они не достигнут стадии L4. Теперь вы можете добавить FUdR в пластины, что не даст червям производить потомство. Кроме того, вам нужно будет перемещать червей на новые пластины каждый день после подсчета, чтобы убедиться, что вы измеряете продолжительность жизни только одного поколения.

Далее удалите всех самцов. Это устранит из эксперимента переменные пола и спаривания. На следующий день подсчитайте количество живых червей на тарелке, обращая внимание на спонтанное движение или реакцию на нежное прикосновение. Удалите всех мертвых червей и запишите цифры. Ежедневно подсчитывайте выживших червей, пока их не останется. В примере протокола мы увидим демонстрацию анализа продолжительности жизни.

- Загрузите в подготовленные засеянные бактериями тарелки по 50 L1 животных каждая. Установите планшеты в инкубатор с температурой 20 градусов Цельси