Анализ яйцекладки: метод количественной оценки яйцекладки C. elegans

- Эксперименты по количественной оценке яйцекладки выявили неврологические компоненты и сигналы окружающей среды, которые влияют на это поведение. Изменения в поведении при откладывании яиц могут свидетельствовать о токсическом воздействии на нервно-мышечную или репродуктивную системы.

Чтобы проверить токсичность, выращивайте синхронизированные по развитию яйца на планшетах с питательной средой для нематод с исследуемым соединением и без него. В этих экспериментах используется убитая теплом пища бактериальных червей, чтобы предотвратить метаболизм соединения бактериями. Позвольте этому поколению расти, пока они не станут молодыми взрослыми.

Затем переместите червей на новые пластины под соответствующим контролем или экспериментальными условиями, и оставьте их откладывать яйца на 24 часа. Каждый день перекладывайте взрослых особей на новую тарелку, а яйца пересчитывайте на предыдущей тарелке. Продолжайте до тех пор, пока взрослые особи не прекратят откладывать яйца, около пяти дней для червей дикого типа. Подсчитайте количество яиц, откладываемых каждым взрослым червем каждый день, и сложите общее количество в конце эксперимента.

В примере протокола мы будем использовать анализ кладки яиц C. elegans для проверки этопозида — химиотерапевтического препарата — на репродуктивную токсичность.

- Инкубируйте синхронизированные по возрасту яйца на планшете NGM, содержащем ДМСО или этопозид, при температуре 20 градусов Цельсия в течение 64 часов, до стадии молодняка. Пересадите пять взрослых червей в новые планшеты NGM без химикатов или в новые планшеты NGM, содержащие ту же химическую предварительную обработку, и инкубируйте их в течение 24 часов.

Пересадите взрослых особей в новые тарелки для НГМ, как только что было продемонстрировано, и подсчитайте количество яиц каждый день. Кроме того, подсчитайте количество червей, которые отползли, умерли или вылупились изнутри. Проводите расчеты по текстовому протоколу.