Ферментативное расщепление и ручная диссоциация: метод подготовки эмбрионов C. elegans к культивированию клеток

- Начните с гранулированных яиц, которые были выделены путем отбеливания взрослых червей. Убедитесь, что каждый этап этой процедуры проводится стерильно, чтобы избежать контаминации культивируемых клеток. Суспензируйте гранулу в растворе хитиназы, фермента, который расщепляет хитин — большой полисахарид, который является структурным компонентом яичной скорлупы.

После соответствующего периода переваривания аккуратно центрифугируйте яйцеклетки и замените надосадочную жидкость средой для клеточных культур, чтобы остановить переваривание. Затем пропустите эмбрионы через иглу 18-го калибра, чтобы механически отделить отдельные клетки. Далее отфильтруйте раствор, чтобы удалить мусор со скорлупы яйца или неотделившиеся комки клеток. Поместите клетки в чашку для культивирования на стеклянную крышку, покрытую агглютинином арахиса — лектином, который помогает клеткам прикрепляться к покровному листу, связывая углеводы на клеточной поверхности.

В примере протокола мы подготовим эмбриональные клетки для морфологической дифференцировки и анализа in vitro.

- Во время работы под ламинарным проточным колпаком, чтобы избежать внесения бактериального загрязнения, повторно суспендируйте гранулированн