Тест на привыкание к прикосновениям: метод изучения неассоциативного обучения у C. elegans

- C. elegans передвигается на боку, генерируя синусоидальные волны вдоль своего тела. Животное движется в прямом направлении, когда волны распространяются от головы к хвосту. И наоборот, когда синусоидальные волны распространяются от хвоста к голове, червь движется назад.

Обратное передвижение, известное как реверсирование, является кратковременным и происходит либо спонтанно, либо вызывается сенсорным стимулом, например, нежным прикосновением к передней части червя. Для проведения теста привыкания к переднему прикосновению изолируют предварительно синхронизированных червей желаемой стадии развития на незасеянных планшетах NGM.

Используя стерилизованный тонкий волосок, выполните нежное прикосновение к передней части тела. Это вызовет реакцию побега, при которой червь выполнит обратное действие. Подождите 10-секундный интервал между стимулами, чтобы червь восстановился, и повторите прикосновение. Чтобы оценить привыкание, которое является формой неассоциативного обучения, запишите количество прикосновений до тех пор, пока обратное не перестанет наблюдаться.

В примере протокола мы увидим демонстрацию теста привыкания к переднему ощущению.

- Во-первых, использование стерилизованной от огня платиновой проволоки 30-го калибра для переноса примерно 10 синхронизированных молодых червей на новые незасеянные пластины NGM. Оставьте червей в покое на пять минут, чтобы дать им время акклиматизироваться к новой пластине. Затем простерилизуйте волосок бровей, прикрепленный к концу деревянной шпажки или зубочистки, обмакнув в 70% этанол.

Протрите чистой безворсовой салфеткой и подождите одну минуту, пока этанол испарится. Аккуратно прикоснитесь к червячку на голове, используя волосы бровей. Повторяйте прикосновения, оставляя 10 секунд между касаниями, чтобы дать червю восстановиться.

Продолжайте касаться с интервалом в 10 секунд, пока червь не перестанет двигаться назад. Запишите количество прикосновений, необходимых для возникновения этого привыкания.

- Важно предусмотреть 10-секундный интервал между прикосновениями, так как это дает животному время на восстановление и помогает получить последовательные анализы поведения привыкания.