Визуализация кальция: метод визуализации нейронной активности у живых C. elegans

- Поместите одного трансгенного червя, экспрессирующего GCaMP - кальциево-чувствительный белок, - в камеру визуализации вместе с бактериальной пищей для червя. Затем запечатайте посуду крышкой и лабораторной пленкой, чтобы предотвратить испарение. Рассмотрите его под сложным микроскопом, оснащенным для широкоугольной эпифлуоресценции. Записывайте покадровые изображения червей, чтобы отслеживать их поведение и захватывать флуоресценцию с помощью программного обеспечения для визуализации.

Трансгенные черви экспрессируют сенсорный белок GCaMP под контролем промотора, который управляет экспрессией GCaMP в определенном нейроне. Когда этот нейрон активируется, он запускает потенциал действия, который деполяризует плазматическую мембрану. При деполяризации в плазматической мембране открываются потенциал-зависимые кальциевые каналы. Это вызывает приток ионов кальция в клетку, что приводит к возбуждению нейронов.

GCaMP в возбужденном нейроне связывает ионы кальция. Это приводит к флуоресциации GCaMP при визуализации червей с помощью флуоресцентного возбуждающего света низкой интенсивности. В примере протокола мы будем использовать визуализацию кальция для визуализации активности интернейрон