Визуализация кальция: метод визуализации нейронной активности у живых C. elegans

0 просмотров2:23 мин • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Поместите одного трансгенного червя, экспрессирующего GCaMP - кальциево-чувствительный белок, - в камеру визуализации вместе с бактериальной пищей для червя. Затем запечатайте посуду крышкой и лабораторной пленкой, чтобы предотвратить испарение. Рассмотрите его под сложным микроскопом, оснащенным для широкоугольной эпифлуоресценции. Записывайте покадровые изображения червей, чтобы отслеживать их поведение и захватывать флуоресценцию с помощью программного обеспечения для визуализации.

Трансгенные черви экспрессируют сенсорный белок GCaMP под контролем промотора, который управляет экспрессией GCaMP в определенном нейроне. Когда этот нейрон активируется, он запускает потенциал действия, который деполяризует плазматическую мембрану. При деполяризации в плазматической мембране открываются потенциал-зависимые кальциевые каналы. Это вызывает приток ионов кальция в клетку, что приводит к возбуждению нейронов.

GCaMP в возбужденном нейроне связывает ионы кальция. Это приводит к флуоресциации GCaMP при визуализации червей с помощью флуоресцентного возбуждающего света низкой интенсивности. В примере протокола мы будем использовать визуализацию кальция для визуализации активности интернейронов AVA в трансгенных C. elegans в агарозных микрокамерах.

- Визуализация кальция выполняется на сложном микроскопе, оснащенном для широкопольной эпифлуоресценции. Чтобы ограничить воздействие света, используйте транзисторно-транзисторный логический сигнал, который запускает светодиод для освещения образца в то время, когда камера записывает кадр.

Запустите серийный видеоролик в течение 24 часов, в котором каждый червь будет отображаться каждые 15–30 минут. Сначала запишите 20 секунд с помощью DIC, затем 20 секунд с помощью флуоресценции GFP и, наконец, изображение сигнала mKate2 для контроля уровней экспрессии.

Для визуального контроля данных используйте карту ложных цветов, чтобы улучшить видимость небольших изменений интенсивности флуоресценции. Наконец, проведите анализ данных о кальции с помощью стандартных процедур.

09:10

Подготовка Острый субвентрикулярной фрагменты зона для кальция изображений

Похожие видео

0 Просмотры

09:32

Прямое изображение ЭР кальция с целевыми-эстеразы Индуцированные красителем (TED)

Похожие видео

0 Просмотры

11:26

Ratiometric кальция изображений отдельных нейронов в себя Caenorhabditis Elegans

Похожие видео

0 Просмотры

03:01

Визуализация кальция в отдельных нейронах, регулирующих яйцекладку у Caenorhabditis elegans

Похожие видео

0 Просмотры

03:17

Визуализация субклеточной динамики кальция в нейронах Caenorhabditis elegans

Похожие видео

0 Просмотры

11:06

В естественных нейронных изображений кальция в C. Элеганс

Похожие видео

0 Просмотры

07:51

Агарозные микрокамеры для долгосрочного Кальций изображений Caenorhabditis Элеганс

Похожие видео

0 Просмотры

08:03

В Vivo Кальций Imaging в C. elegans мышцы стены тела

Похожие видео

0 Просмотры

06:50

Визуализация кальция у свободно ведущих себя caenorhabditis elegans с хорошо контролируемой, нелокализованной вибрацией

Похожие видео

0 Просмотры

09:14

Визуализация дендритных шипов при Caenorhabditis elegans

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 1 августа 2026