Измерение мышечной площади C. elegans: стандартизированный метод количественной оценки морфологии поперечно-полосатой мышцы

- У C. elegans есть два типа мышц. К одиночным саркомерным или непоперечнополосатым мышцам относятся мышцы глотки и вульвы. Множественные саркомеры или косо поперечно-полосатые мышцы представляют собой ромбовидные мышцы стенки тела, названные так из-за регулярного поперечно-полосатого рисунка их миозиновых волокон.

Они расположены в шахматном порядке парами в виде четырех пучков, ориентированных в продольном направлении в четырех квадрантах тела червя, рассматриваемых в поперечном сечении. Каждая клетка имеет множество одинаково расположенных точек прикрепления к гиподерме и кутикуле. Такое расположение помогает перевести волны мышечных сокращений в плавное передвижение.

Чтобы визуализировать эти мышцы, визуализируйте иммобилизованных червей с трансгенно меченым GFP-меченным миозином с помощью флуоресцентной конфокальной микроскопии. Используйте аналитическое программное обеспечение для измерения площади поперечнополосатой мышечной клетки и любых пробелов в рисунке волокон этой клетки. Пробелы в организации мышечных волокон могут указывать на нарушение из-за деградации волокон или накопления клеточного мусора. Рассчитайте отношение площади зазора к общей площади, чтобы определить величину сбоев. В примере протокола мы количественно оценим морфологию мышц стенки тела с использованием Фиджи.

- Чтобы измерить площадь мышечных клеток, откройте изображение в программе Fiji и используйте функцию «Выделение полигона», чтобы тщательно обвести вокруг одной косой мышечной клетки. Скорректируйте линию многоугольника в конце, перетащив точку привязки для улучшения трассировки. Перейдите на вкладку «Анализ» в верхней части программного обеспечения и нажмите «Измерить», чтобы рассчитать выбранную площадь.

Для мышечных клеток с дегенерированной или отсутствующей областью обведите недостающую область с помощью инструмента выделения полигона и нажмите Измерить еще раз. Если пробелов несколько, обведите каждый из них отдельно. Рассчитайте отношение площади зазора к площади всей ячейки. Высокий коэффициент указывает на более высокую степень мышечной дегенерации, и если отсутствуют недостающие области, коэффициент рассчитывается как нулевой.