Микроинъекция гонад: метод доставки соединения непосредственно в зародышевую линию C. elegans

- Чтобы подготовиться к инъекции, с помощью червячной кирки уложите дорожку галоидоуглеродного масла на агарозную подушечку. Поместите червей в масло и обездвижьте их, аккуратно надавливая на агаровую подушку. Убедитесь, что масло полностью покрывает животных. Он позволяет кислороду поступать к червям, предотвращая высыхание. Затем поместите агарозную подушечку на инъекционный микроскоп и расположите иглу перпендикулярно червю, нацеливаясь на дистальный конец плеча гонады.

Аккуратно протолкните иглу через кутикулу и введите в плечо гонады интересующую вас нуклеиновую кислоту или соединение. Каждое плечо гонады содержит синцитий зародышевой линии, который будет развиваться в отдельные ооциты. Материал, введенный в дистальную гонаду, будет включен в эти ооциты и повлияет на следующее поколение.

После введения червей замените масло на буфер M9. Как только черви начнут двигаться, переложите их на тарелку с агаром NGM с бактериальной пищей. В следующем протоколе метод микроинъекции гонад используется для доставки комплекса Cas9 к мишени и редактированию гена dpy-10.

- Начните с приготовления подушечек C. elegans и агарозы, как описано в текстовом протоколе. Поместите агарозную инъекцион