УФ-облучение: метод интеграции внехромосомных решеток

- Создание внехромосомных массивов ДНК с помощью микроинъекций — самый простой метод получения трансгенных штаммов червей — приводит к получению генетических элементов, которые не передаются стабильно во время деления клеток и, следовательно, демонстрируют переменную скорость наследования и уровни экспрессии. Цель интеграции матрицы в хромосому состоит в том, чтобы уменьшить эту генетическую нестабильность и изменчивость.

Для этого необходимо начать с синхронизированной по возрасту популяции трансгенных червей L4, которые несут внехромосомный массив, ранее введенный с помощью микроинъекции, и позволяют им вырасти во взрослых особей. Переложите этих взрослых особей в новые тарелки и дайте им отложить яйца, пока на каждой тарелке не будет не менее 30 яиц. Удалите взрослых особей и дайте яйцам вырасти, пока они не достигнут стадии L4. Затем облучите червей ультрафиолетовым светом. Это приводит к случайным двухцепочечным разрывам в геномной ДНК, где механизм восстановления ДНК червей может произвольно включать массив.

После ночного восстановительного периода подсчитайте количество выживших червей. Небольшой процент мертвых червей свидетельствует об эффективном облучении. Наблюдайте за