Анализ на мечение импульса бромоксиуридином (Bromodeoxyuridine): метод измерения пролиферации клеток

- Начните с суспензии клеток лейкемии, содержащей необходимую плотность клеток. Центрифугируйте и ресуспендируйте клетки в питательной среде, содержащей сыворотку. Добавление сыворотки способствует непрерывному росту клеток и их перемещению через различные фазы клеточного цикла. Разведите клетки в растворе для мечения бромодоксиуридином или BrdU и выращивайте их в физиологических условиях в течение необходимого времени.

Клетки в синтезе или S-фазе поглощают BrdU — аналог тимидина, который заменяет тимидин в процессе репликации ДНК. Центрифугируйте элементы для удаления избытка BrdU и ресуспендируйте элементы в подходящей среде. Переложите ячейки в многолуночную пластину. Позволяют клеткам расти в физиологических условиях в течение разных временных периодов.

В различные периоды времени клетки проходят через оставшуюся часть фаз S, G2, митоза и G1 и вступают в следующий клеточный цикл, что позволяет оценить пролиферацию клеток. Выполните окрашивание антител для маркировки BrdU флуорохром-антителом и измерьте пролиферацию клеток с помощью проточной цитометрии.

Внутри проточного цитометра флуорохромы поглощают энергию лазера и флуоресцируют. Количество пролиферирующих клеток напрямую к