Иммунофлуоресцентное окрашивание BrdU: методика идентификации клеток в разных фазах клеточного цикла

- Бромоксиуридин или BrdU – синтетический аналог нуклеозида тимидина. Во время фазы синтеза клеточного цикла BrdU замещает тимидин и интегрируется во вновь синтезированную ДНК. Встроенный BrdU позволяет отслеживать прогрессию клеточного цикла. Чтобы обнаружить встроенный BrdU, сначала фиксируют и проникают в клетки, чтобы сделать их проницаемыми.

Затем обработайте клетки ферментом ДНКазы, чтобы расщепить нити ДНК и обнажить инкорпорированный BrdU. Затем добавьте подходящее флуоресцентное меченое антитело против BrdU. Антитело проникает в ядро и легко связывается с обнаженным BrdU, присутствующим в ДНК.

Кроме того, обработайте клетки подходящим флуоресцентным ДНК-связывающим красителем. Краситель связывается с ДНК, что позволяет количественно оценить общее содержание ДНК. Используйте проточную цитометрию для обнаружения флуоресценции как из меченого BrdU, так и из ДНК.

Интенсивность флуоресценции меченой ДНК дифференцирует клетки в разных фазах клеточного цикла на основе вариаций общего содержания ДНК. Флуоресцентный сигнал от BrdU идентифицирует текущее положение клеточного цикла клеток, включенных в BrdU.

В этом примере мы выполним иммунофлуоресцентное окрашивание BrdU клеток остр