2D кокультура лейкозных клеток с BMSC: метод получения субпопуляций лейкозных клеток

- В системе 2D-совместного культивирования несколько типов клеток выращиваются вместе в плоских культуральных планшетах. Эта система культивирования облегчает изучение клеточных взаимодействий и поведения in vitro. Чтобы создать кокультуру лейкозных клеток со стромальными клетками костного мозга, или BMSC, добавьте суспензию лейкозных клеток к адгезивной монослойной культуре BMSCs. Инкубируйте планшет в соответствующих условиях культивирования. Поддерживайте сокультуру, заменяя 90% питательной среды каждый четвертый день.

Во время этой 2D-кокультуры лейкозные клетки взаимодействуют с BMSC и локализуются в различных областях культуры, образуя три субпопуляции. Фазово-контрастная микроскопия позволяет визуально дифференцировать три субпопуляции. Первая группа лейкозных клеток, которые кажутся свободно плавающими в среде, относятся к категории взвешенных клеток. Вторая группа лейкозных клеток, которые прилипли к поверхности монослоя BMSC, выглядит яркой и классифицируется как фазово-светлые клетки.

Третья группа лейкозных клеток, которые мигрировали под монослой, выглядит тусклой и классифицируется как клетки с затемненной фазой. В соответствии с приведенным ниже протоколом мы выполня