Сбор лейкозных субпопуляций: метод пространственного разделения субпопуляций лейкемических клеток из 2D кокультуры

- Когда лейкозные клетки культивируются совместно с мезенхимальными стромальными клетками, они взаимодействуют со стромальными клетками и образуют три субпопуляции. Свободно плавающие взвешенные клетки, светлые по фазе клетки, прилипшие к поверхности мезенхимального монослоя, и тусклые по фазе клетки под мезенхимальным монослоем. Чтобы разделить каждую субпопуляцию, берут планшет для культивирования тканей с монослоем мезенхимальных стромальных клеток.

Посейте лейкозные клетки, присутствующие в опухолеспецифичных питательных средах, на монослой и инкубируйте планшет в течение желаемого времени. Далее соберите опухолевые клетки в суспензию путем пипетирования свободно плавающих клеток в отдельную пробирку. Теперь добавьте свежую среду в планшет и энергично пипеткуйте, чтобы вытеснить яркие в фазе опухолевые клетки с поверхности мезенхимального монослоя.

Соберите эти клетки, пипетируя их в отдельной пробирке. Добавьте трипсин в пластину для удаления адгезивных мезенхимальных клеток. Добавьте фетальную бычью сыворотку, или FBS, чтобы остановить действие трипсина и разрушить клеточные агрегаты. Теперь соберите ячейки с затемненной фазой в пробирку. Центрифугируйте все три пробирки, сод