Окрашивание по Май-Грюнвальду-Гимзе: метод окрашивания клеток костного мозга

- Май-Грюнвальд-Гимса, или окрашивание MGG, представляет собой двухэтапную процедуру дифференциального окрашивания клеток костного мозга, или BMC. Чтобы начать окрашивание, получите концентрированный однослойный мазок БМК на предметном стекле. Дайте мазку высохнуть на воздухе. Сначала обработайте клетки красителем Май-Грюнвальда, содержащим эозин и растворенный в метаноле метиленовый синий.

Растворитель метанол первоначально фиксирует клетки. Метиленовый синий, основной краситель с чистым положительным зарядом, окрашивает кислые клеточные компоненты, такие как нуклеиновые кислоты. Эозин, кислотный краситель с чистым отрицательным зарядом, окрашивает основные клеточные компоненты, такие как цитоплазматические катионные белки. Обработайте клетки буферным раствором с pH 6,8, чтобы краситель мог осаждаться и хорошо связываться с клеточными материалами.

Кроме того, обработайте клетки красителем Гимзы, также содержащим кислотные и основные красители, для усиления общего эффекта окрашивания. Основные красители, лазурь и метиленовый синий, усиливают окрашивание кислотных компонентов, в то время как кислотный краситель, эозин, усиливает окрашивание основных компонентов.

Под микроскопом эритроциты выглядят розовато-коричневыми, а тромбоциты – мелкими фиолетовыми точками. Гранулоциты имеют фиолетово-синее многолопастное ядро и красную гранулированную цитоплазму. Агранулоциты выглядят прозрачно-голубыми с большим фиолетово-розовым ядром. В следующем протоколе мы показываем окрашивание клеток костного мозга методом MGG.

- Чтобы подготовить клетки костного мозга к окрашиванию, сначала поместите горки в одноразовые камеры с предварительно прикрепленными фильтрующими картами и поместите камеры в цитоцентрифугу. Добавьте 100 микролитров буфера FACS в каждую камеру фильтрующей карты и кратко центрифугируйте предметные стекла. В конце отжима добавьте по 100 микролитров клеток в каждую камеру и центрифугируйте клетки.

Затем осторожно выньте предметные стекла из камер для сушки на воздухе. Чтобы окрашивать клетки костного мозга, погрузите предметные стекла в баночку Coplin, содержащую раствор Мэя-Грюнвальда, на 5 минут. Далее переложите предметные стекла в банку с буферным раствором с pH 6,8 на 1 минуту. Затем перенесите предметные стекла в раствор Giemsa R на 10 минут, после чего следует 10-секундное промывание pH-нейтральной водой.

После промывки дайте предметным стеклам высохнуть на воздухе и нанесите по одной капле монтажного средства на каждый образец. Затем поместите один край покровного стекла на предметное стекло и осторожно опустите покровное стекло на ячейки, осторожно надавливая, чтобы удалить пузырьки воздуха.