Центрифугирование с градиентом плотности: метод выделения клеток ХЛЛ из периферической крови

- У пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом, или ХЛЛ, значительно увеличивается количество В-клеточных лимфоцитов в костном мозге и крови. Чтобы выделить эти клетки ХЛЛ из образца крови, сначала обработайте образец коктейлем для обогащения В-клеток человека, который разделяет В-клетки с помощью отрицательного отбора. Антитела в коктейле специфически распознают и сшивают антигены, экспрессируемые не-В-клетками и эритроцитами, образуя плотные комплексы.

Затем образец наносят на среду с градиентом плотности, имеющую плотность, оптимальную для выделения лимфоцитов. При последующем центрифугировании различные компоненты крови разделяются в зависимости от вариаций их плотности относительно градиентной среды. Комплексы эритроцитов-не-В-клеток с более высокой плотностью оседают через среду, образуя гранулы. Наименее плотная плазменная фракция образует самый верхний слой. Менее плотные клетки ХЛЛ образуют белый слой на границе плазмы и плотной среды.

Аккуратно переложите белый слой в свежую трубочку. Снова центрифугируйте для получения гранулы, содержащей очищенные клетки ХЛЛ. В следующем протоколе мы показываем выделение клеток хронического лимфоцитарного лейкоза из образцов крови п