Центрифугирование с градиентом плотности: метод выделения клеток ХЛЛ из периферической крови

0 views • 3:40 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- У пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом, или ХЛЛ, значительно увеличивается количество В-клеточных лимфоцитов в костном мозге и крови. Чтобы выделить эти клетки ХЛЛ из образца крови, сначала обработайте образец коктейлем для обогащения В-клеток человека, который разделяет В-клетки с помощью отрицательного отбора. Антитела в коктейле специфически распознают и сшивают антигены, экспрессируемые не-В-клетками и эритроцитами, образуя плотные комплексы.

Затем образец наносят на среду с градиентом плотности, имеющую плотность, оптимальную для выделения лимфоцитов. При последующем центрифугировании различные компоненты крови разделяются в зависимости от вариаций их плотности относительно градиентной среды. Комплексы эритроцитов-не-В-клеток с более высокой плотностью оседают через среду, образуя гранулы. Наименее плотная плазменная фракция образует самый верхний слой. Менее плотные клетки ХЛЛ образуют белый слой на границе плазмы и плотной среды.

Аккуратно переложите белый слой в свежую трубочку. Снова центрифугируйте для получения гранулы, содержащей очищенные клетки ХЛЛ. В следующем протоколе мы показываем выделение клеток хронического лимфоцитарного лейкоза из образцов крови пациента.

- Получение образцов периферической крови у пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом в пробирках для сбора крови ЭДТА с подсчетом лейкоцитов.

- Образцы крови человека следует расценивать как опасные, так как они потенциально содержат вирусы, передающиеся через кровь. Пожалуйста, убедитесь, что эти образцы обрабатываются в шкафу биобезопасности класса II и что пользователь всегда одет в лабораторный халат и перчатки. Утилизируйте материалы, зараженные кровью, и продезинфицируйте их.

- Если количество лейкоцитов равно или превышает 40 миллионов клеток на миллилитр, разбавьте образец в соотношении 1 к 1 с помощью промывочного буфера RT CLL. Затем поместите градиент плотности RT в коническую центрифужную пробирку соответствующего размера для образца. Тщательно выложите образец поверх среды и центрифугируйте при 400-кратном G в течение 30 минут при RT.

С помощью пластиковой пастеровской пипетки аккуратно соберите белый слой мононуклеарных ячеек, собранных на границе градиентной плотности среды и промывочного буфера ХЛЛ. Переложите этот изолированный монослой в свежую коническую центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров. Для промывки ячеек добавьте в этот монослой 40 миллилитров промывочного буфера ХЛЛ и центрифугируйте при 300-кратном G в течение 10 минут при комнатной температуре.

Выбросьте надосадочную жидкость, поверните дно тюбика, чтобы снова суспендировать гранулу, и повторите эту промывку. Выбросьте надосадочную жидкость, снова щелкните дном трубки, а затем снова суспендируйте клеточную гранулу в установленном объеме буфера для промывки ХЛЛ, в зависимости от размера гранулы. После подсчета клеток и после проточной цитометрии для проверки чистоты клеток поместите клетки в планшеты для культуры тканей с необходимой плотностью клеток, готовые к стимуляции или медикаментозному лечению.

07:11

Выделение Лейкоциты проникают из кожи мыши, используя ферментативные дайджест и Gradient Разделение

Related Videos

0 Views

10:21

Характеристика и изоляция первичной микроглии мыши по плотности градиентного центрифугирования

Related Videos

0 Views

03:28

Коллекция спермы дифференциальной качества с использованием градиентного центрифугирования плотность

Related Videos

0 Views

05:23

Выделение гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови для создания иммунной системы мышей

Related Videos

0 Views

14:04

Нейтрофильная Выделение и анализ для определения их роли в клеточной лимфомы чувствительность к терапевтических агентов

Related Videos

0 Views

09:09

Подготовка первичных острый лимфобластный лейкоз клеток в разных клеточного цикла этапов, центробежные сцеживания

Related Videos

0 Views

09:52

Assay иммунопреципитации Chromatin для выявления роман NFAT2 целевых генов в хронический лимфоцитарный лейкоз

Related Videos

0 Views

07:39

Изоляция CD4+ Т-клеток и анализ циркулирующих Т-фолликулярная помощник (cTfh) клеток подмножеств из периферической крови с помощью 6-цвет потока цитометрии

Related Videos

0 Views

11:39

Субклеточная фракция первичных клеток хронического лимфоцитарного лейкоза для мониторинга торговли ядерным/цитоплазмическим ибелением

Related Videos

0 Views

08:12

Выделение нейтрофилов человека из цельной крови и пальто Баффи

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026