Получение субклеточных фракций из лейкозных клеток: метод получения клеточных и ядерных фракций из лейкозных клеток

- В лейкозных клетках нарушается регулирование макромолекул, таких как несколько белков, подавляющих опухоль, между ядром и цитоплазмой. Неправильная локализация этих белков делает их неактивными, что приводит к неконтролируемому росту лейкозных клеток. Мы можем определить аберрантное расположение таких белков, генерируя цитоплазматическую и ядерную фракцию из лейкозных клеток.

Начните с того, что возьмите желаемый объем лейкозных клеток в микрофугическую пробирку и центрифугируйте для гранулирования клетки. Повторно суспендируйте гранулу в буфере для гипотонического лизиса, а затем добавьте желаемую концентрацию моющего средства. Гипотонический буфер для лизиса заставляет клетки набухать и разрывать плазматическую мембрану, оставляя ядерную мембрану нетронутой, тем самым выделяя цитоплазматические фракции. Моющее средство помогает в извлечении белков из цитоплазматических органелл.

Центрифугируйте лизированные клетки в суспензии и перенесите надосадочную жидкость в свежую пробирку. Надосадочная жидкость содержит цитоплазматическую фракцию клетки. Чтобы приготовить ядерную фракцию, оставшуюся гранулу суспендируют в буфере полного лизиса и добавьте моющее средство. Центрифугируйте и