Забор костного мозга из задних конечностей мышей

- Костный мозг — это губчатая студенистая ткань, присутствующая в полом центре костей. Он содержит гемопоэтические стволовые клетки, которые вырабатывают клетки крови, ключевой компонент иммунной системы. Выделение костного мозга из более крупных костей, таких как бедренная и большеберцовая кости, обеспечивает высокий выход клеток.

Чтобы собрать костный мозг, поместите усыпленную мышь в лежачее положение и простерилизуйте кожу с помощью этанола. Разрежьте брюшную полость и снимите кожу, чтобы обнажить задние конечности. Сломайте большеберцовую кость, длинную кость ноги, и поместите ее в холодный PBS для поддержания физиологических условий. Вывихните коленную чашечку и удалите мышцы, чтобы обнажить бедренную кость, бедренную кость.

Отрежьте бедренную кость от нижней части кости и поместите в холодный ПБС. Проделайте отверстие в микроцентрифужной пробирке меньшего объема и поместите в нее обе кости так, чтобы открытый конец костей был обращен к отверстию. Поместите пробирку с костями в микроцентрифужную пробирку большего объема и центрифугируйте двухслойные пробирки для гранулирования костного мозга. Используйте собранный костный мозг для дальнейшего анализа. В этом протоколе мы будем извлекать костный мозг из задних конечностей мыши.

- Для забора костного мозга поместите мышь C57 black-6 в возрасте от 6 до 10 недель в лежачее положение на стерильную хирургическую прокладку и используйте 70% этанол для стерилизации брюшной полости и задних конечностей. С помощью препарных хирургических ножниц для вскрытия брюшной полости и снимите кожу, обнажив задние конечности. Используя пару повязочных щипцов с тупым концом, держите большеберцовую кость мыши прямо под лодыжкой и используйте пару изогнутых перевязочных щипцов, чтобы стабилизировать большеберцовую кщипцы ниже перевязочных щипцов с тупым кончиком.

Используйте перевязочные щипцы с тупым концом, чтобы сломать большеберцовую кость и удалить мышцу, чтобы обнажить кость, прежде чем помещать большеберцовую кость в холодный PBS. Переместите стабилизирующие изогнутые перевязочные щипцы на бедренную кость и сдвиньте тупые перевязочные щипцы ниже коленного сустава, чтобы удерживать коленную чашечку. Осторожно потяните вверх, чтобы вывихнуть коленную чашечку, и удалите мышцу из коленной чашечки, чтобы обнажить бедренную кость. Удерживайте обнаженную бедренную кость изогнутыми перевязочными щипцами и хирургическими ножницами разрежьте бедренную кость от нижней части кости. Затем поместите бедренную кость в PBS.

Затем с помощью иглы 18-го калибра проделайте отверстие в микроцентрифужной пробирке объемом 0,5 миллилитра и поместите обе кости в пробирку открытыми концами костей вниз в отверстие. Поместите пробирку объемом 0,5 миллилитра в микроцентрифужную пробирку объемом 1,7 миллилитров и вращайте двухслойные пробирки в микроцентрифуге. В конце центрифугирования убедитесь, что костный мозг был извлечен на дно пробирки.