Обогащение Т-клеток: метод выделения Т-клеток из смешанной популяции клеток с помощью магнитной сепарации

- Т-клетки, класс лимфоцитов, играют активную роль в борьбе с инфекцией. Наряду со многими другими типами клеток крови, иммунокомпетентные Т-клетки присутствуют в селезенке и лимфатических узлах мыши. Чтобы избирательно изолировать Т-клетки, собирайте мышиную селезенку и лимфатические узлы и мацерируйте их на клеточном фильтре. Промойте ткань соответствующей средой для получения одноклеточной суспензии.

Добавьте хлорид аммония и калий, или буфер ACK, чтобы лизировать эритроциты. Центрифуга для отделения неповрежденных клеток крови от лизата. Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клетки в подходящем буфере. Обработайте суспензию смесью биотинилированных антител к мышам для нацеливания на клетки крови, такие как гранулоциты, В-клетки, NK-клетки и любые оставшиеся эритроциты. Т-клетки не являются мишенью и, следовательно, остаются непомеченными.

Далее добавьте в суспензию антибиотин магнитные микрошарики. Все меченые биотином клетки связываются с микрогранулами. Под воздействием сильного магнитного поля магнитно меченые клетки прилипают к стенке трубки. Немеченые Т-клетки остаются во взвешенном состоянии. Соберите несвязанные обогащенные Т-клетки в свежую пробирку д