Генерация дендритных клеток из костного мозга: метод получения дендритных клеток из костного мозга мыши

- Дендритные клетки или ДК являются ключевыми антигенпрезентирующими клетками, которые активируют Т-клетки. У пациентов с лейкемией эти клетки плохо экспрессируют опухолеассоциированный антиген и не могут вызвать антиген-специфический иммунный ответ. Дендритные клетки в изобилии присутствуют в костном мозге. И, следовательно, костный мозг является предпочтительным местом для их выделения, чтобы помочь изучить их роль в развитии рака.

Чтобы получить дендритные клетки, извлеките костный мозг из бедренной или большеберцовой кости усыпленной мыши с помощью шприца, наполненного средой, чтобы вымыть его. Центрифугируйте и ресуспендируйте гранулу в аммоний-хлоридно-калийный буфер или буфер ACK для лизиса эритроцитов. Теперь добавьте питательную среду для остановки лизиса и центрифугирования. Повторно суспендируйте гранулу в питательной среде, содержащей антибиотик. Добавьте гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор или GM-CSF и перенесите клеточную суспензию на пластину Петри.

Инкубируйте пластину в течение желаемого времени. GM-CSF помогает клеткам-предшественникам дифференцироваться в дендритные клетки. Наконец, активируйте клетки липополисахаридами или ЛПС, которые связ