Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 4:57 мин. • April 30th, 2023
- Факторы транскрипции — это белки, которые связываются с определенным участком ДНК для регуляции экспрессии генов. Ошибки в транскрипционных факторах изменяют эту активность, что приводит к чрезмерной экспрессии генов, что вызывает рак. Чтобы понять роль факторов транскрипции и регуляции генов, мы можем провести иммунопреципитацию хроматина или CHIP, и сдвиг хроматина является важным этапом в рабочем процессе CHIP.
Для сдвига хроматина стабилизируйте комплекс ДНК-белок, добавив формальдегид. Формальдегид сшивает белки с соответствующей последовательностью ДНК, образуя ковалентные связи. Затем используйте подходящий буфер для лизиса для лизиса клеток для высвобождения хроматина, содержащего сшитые ДНК-белковые комплексы, и центрифугуйте. Сдвиг хроматина осуществляется с помощью фермента микрококковой нуклеазы. Этот фермент расщепляет хроматин между нуклеосомами и переваривает свободные концы ДНК. Центрифугируйте смесь и соберите надосадочную жидкость.
Загрузите надосадочную жидкость на агарозный гель TBE, чтобы проанализировать соответствующий размер фрагментов ДНК. Подайте на гель электрическое поле, которое заставит отрицательно заряженную хроматиновую ДНК двигаться к аноду. Боле
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео