Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 6:29 мин. • April 30th, 2023
- Хроматиновая иммунопреципитация, или ChIP, — это метод, используемый для определения белково-ДНК-взаимодействий в клетках. Белки связываются с определенными участками ДНК и регулируют экспрессию генов. Во-первых, стабилизируют комплекс ДНК-белок с помощью формальдегида. Формальдегид сшивает белки с соответствующей последовательностью ДНК, образуя ковалентные связи.
Затем используйте подходящий буфер для лизиса для лизиса клеток с целью высвобождения хроматина, содержащего сшитые ДНК-белковые комплексы. Центрифугировать суспензию и ультразвуком обрабатывать надосадочную жидкость для получения фрагментов хроматина. Впоследствии пометьте образец подходящим антителом, которое специфически связывается с ДНК-связанным белком.
Добавьте в образец специализированные магнитные шарики. Шарик распознает антитело и связывается с ним. С помощью магнита соберите магнитные шарики с комплексом антитело-белок-ДНК. Промойте образец, чтобы удалить несвязанный хроматин или антитела. Добавьте в комплекс буфер с высокой концентрацией соли и инкубируйте при более высоких температурах, чтобы обратить вспять поперечные связи белков ДНК.
С помощью магнита соберите надосадочную жидкость, содержащую ДНК и бе
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео