Магнитно-активируемая сортировка клеток: метод выделения c-Kit положительных клеток

- c-Kit, или CD117, представляет собой трансмембранный рецептор тирозинкиназы, экспрессируемый гемопоэтическими стволовыми или прогениторными клетками, присутствующими в костном мозге и крови. Он также является маркером для выявления острого миелоидного лейкоза.

Чтобы выделить c-Kit положительные клетки, соберите кости ног мышей и раздавите их, чтобы освободить костный мозг изнутри. Отфильтруйте суспензию костного мозга, чтобы удалить любые костные фрагменты. Нанесите слой фильтрата, содержащего клетки костного мозга, на среду с градиентом плотности и центрифугируйте для отделения мононуклеарных клеток от других фракций.

Соберите мутный слой мононуклеарных клеток в пробирку, содержащую микрогранулы, конъюгированные с антителами к CD117 мыши. Инкубируйте комплексы антитела-гранулы для связывания с рецепторами CD117 на c-Kit положительных клетках. Пропустите инкубированную суспензию через магнитную колонку, помещенную в магнитное поле. Все положительные клетки c-Kit, меченные магнитными микрогранулами, остаются в колонке, в то время как немеченые клетки проходят через нее.

Извлеките колонку из магнитного поля и промойте содержимое с помощью подходящего буфера для элюирования положите