Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 4:59 мин. • April 30th, 2023
- Ретровирусы — это РНК-вирусы, которые реплицируются с помощью обратной транскриптазы для преобразования своего генома РНК в двухцепочечную ДНК и постоянной интеграции в геном хозяина. Новые вирусные частицы выходят из клетки и могут заражать другие клетки. В генной терапии рака используются ретровирусные векторы для введения терапевтических генов в клетки-мишени с помощью метода, называемого трансдукцией, чтобы подавить мутировавший ген или уничтожить клетки.
Чтобы получить ретровирусные векторы с высоким титром, трансфектируйте клетки HEK 293 трансфекционной смесью, содержащей желаемую ретровирусную плазмиду, упаковочную плазмиду и подходящий трансфектирующий агент. Инкубируйте клетки. Трансфектирующий агент способствует доставке обеих плазмид в клетки.
Ретровирусная плазмида кодирует вирусный геном с геном-мишенью, в то время как упаковочная плазмида кодирует белки вирусной оболочки. Клеточный механизм упаковочных клеток формирует ретровирусные частицы и высвобождает их в среду. Соберите вирусную надосадочную жидкость и центрифугуйте для удаления клеток.
Переносите желаемую концентрацию вирусных частиц и раковых клеток на культуральную пластину, покрытую фибронектином, чтобы об
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео