Отрицательная иммуномагнитная селекция: метод очистки В-клеток из мононуклеарных клеток периферической крови

Мононуклеарные клетки периферической крови или PBMC включают В-клетки, Т-клетки, естественные киллеры или NK-клетки, а также моноциты. В-клетки вырабатывают молекулы иммуноглобулина для борьбы с инфекцией. При лейкемии эти клетки размножаются и метастазируют в разные органы.

Чтобы изолировать В-клетки, начните с суспензии выделенных PBMC. Добавьте первичную смесь антител, направленную против специфических молекул клеточной поверхности, называемых кластером дифференцировки или CD. Специфические антитела связываются с молекулой CD-3 на Т-клетках, молекулой CD-14 на моноцитах и молекулой CD-16 на NK-клетках, оставляя В-клетки непомеченными.

Далее промойте образец, чтобы удалить несвязанные антитела. Добавьте в образец магнитные микрогранулы, сопряженные с вторичными антителами. Вторичные антитела связываются с ФК-областью первичных антител, прикрепленных к конкретным клеткам. Поместите пробирку, содержащую меченую клеточную суспензию, под воздействие магнитного поля. В полевых условиях магнитно помеченные клетки мигрируют и связываются со стенкой трубки, что приводит к отрицательному отбору нежелательных клеток. Соберите надосадочную жидкость, содержащую обогащенные В-клетки, в свежую