Внеклеточный метаболизм пуринов: анализ на основе ВЭЖХ для измерения выработки и метаболизма аденозина в лейкозных клетках

- Аденозин, пуриновый нуклеозид, присутствующий в номинальных концентрациях во внеклеточном пространстве, помогает контролировать пролиферацию клеток в физиологических условиях. При патологических состояниях, таких как лейкемия, концентрация внеклеточного аденозина увеличивается и подавляет иммунный ответ против раковых клеток. Накопление аденозина происходит либо в результате дефосфорилирования нуклеотидов АТФ или АДФ, либо из-за нарушения деградации аденозина до нуклеозида инозина.

Чтобы измерить выработку и потребление аденозина, культивируйте раковые клетки в присутствии нуклеотидного субстрата. Метаболическая активность аденозина в клетках определяет концентрации различных молекул пурина, присутствующих в культуре. Центрифуга для удаления клеток и получения молекул пурина в надосадочной жидкости.

Чтобы отделить и количественно определить пурины, переложите образец в соответствующие флаконы. Загрузите их в колонку с обращенной фазой, высокоэффективной жидкостной хроматографией или RP-ВЭЖХ, содержащую неподвижную фазу, иммобилизованную гидрофобными лигандами. Проходя через колонку, гидрофобные молекулы адсорбируются к лигандам и удерживаются на основе их гидрофобности. Наименее