Анализ побочных популяций: метод выделения боковой популяции опухолевых клеток у рыбок данио

- Химиотерапевтическое лечение опухолей, как правило, нацелено на высокопролиферативные клетки, оставляя после себя небольшое подмножество популяции стволовых клеток, что приводит к рекапитуляции опухоли. Эти стволовые клетки называются побочной популяцией. Поскольку в популяции побочных веществ отсутствуют специфические клеточные маркеры, мы используем анализ оттока красителя, чтобы изолировать их от других опухолевых клеток.

Для начала добавьте краситель Hoechst в изолированные опухолевые клетки рыбок данио. Хёхст проникает в ядро и связывается с богатой A-T областью в малой борозде ДНК. Боковая популяция клеток имеет более высокую концентрацию транспортеров ABC на поверхности, что приводит к быстрому оттоку красителя за пределы клетки, демонстрируя низкую флуоресценцию.

Возьмите еще один флакон с опухолевыми клетками, обработанными Hoesct, и добавьте в него верапамил. Этот флакон действует как контроль, потому что верапамил блокирует транспортеры ABC, вызывая уменьшение оттока Хехста, следовательно, увеличивая флуоресценцию в популяции побочных веществ.

Инкубируйте контрольные и выборочные клетки в темноте. Затем противодействуйте окрашиванию клеток йодидом пропидия, который про