Методика забора и диссоциации ганглиев дорсальных корешков для нейрональных культур

Возьмите участок позвоночного столба крысы и разделите его, чтобы удалить спинной мозг.

Отделите ганглии дорсальных корешков, или DRG, скопление нейронов, окруженных сателлитными глиальными клетками, или SGC.

Поместите DRG в питательную среду. Удалите нервные корешки, чтобы уменьшить загрязнение SGC.

Обработайте коллагеназой для разрушения тканевого матрикса и промойте для удаления ферментов.

Вводите трипсин для нарушения межклеточных связей. Добавьте сыворотку, содержащую белки, которые дезактивируют трипсин.

Добавьте питательную среду и механически диссоциируйте ткань. Отфильтруйте суспензию для выделения отдельных клеток и центрифугируйте для удаления остатков тканей.

Повторно суспендируйте клетки, чтобы наложить их на среду с градиентом плотности, и центрифугируйте.

Нейроны с более высокой плотностью располагаются на дне, облегчая разделение SGC.

Ресуспендируйте нейроны в культуральной среде. Перенесите их на культуральный субстрат, хорошо покрытый слоем, позволяющий прикрепить клетки.

Добавка с факторами роста нервов для выживания нейронов.