Мониторинг глутамата in vivo в режиме реального времени с использованием микроэлектродной матрицы, покрытой ферментами

Начните с мыши, находящейся под наркозом, закрепленной на стереотаксической раме, с обнаженным черепом.

Определите опорные точки черепа, а затем отметьте координаты цели.

Просверлите вокруг метки, удалите костный лоскут, чтобы обнажить ткани мозга, и очистите поверхность.

Прикрепите к стереотаксической рамке многоэлектродную матрицу или МЭА, покрытую ферментом глутаматоксидазой, и микропипетку.

Поместите электрод сравнения вдали от MEA, сохраняя при этом контакт жидкости с мозгом, чтобы завершить цепь.

Наполните микропипетку раствором глутамата.

Теперь опустите MEA и микропипетку в ткань мозга, богатую нейронами и астроцитами. Запишите базовый электрический сигнал от MEA.

Введите раствор глутамата для быстрого повышения уровня глутамата во внеклеточном пространстве, содержащем МЭА.

Глутаматоксидаза на MEA окисляет глутамат, генерируя электрический сигнал.

По мере того, как астроциты поглощают глутамат, внеклеточные уровни глутамата снижаются, снижая сигнал и позволяя проводить мониторинг глутамата в режиме реального времени.

При этой процедуре животное помещают в стереотаксическое устройство, а с помощью воздушных решеток стабилизируют его голову. Убедитесь, что животное закреплено