Оценка дегенерации нейронов в срезах мозга мышей с помощью окрашивания серебром

Начните с лотка для окрашивания, содержащего неподвижные участки ткани мозга мыши, демонстрирующие дегенерацию нейронов.

Добавьте воду двойной дистилляции, чтобы промыть секции.

Поместите срезы в раствор нитрата серебра и инкубируйте.

Ионы серебра избирательно связываются с дегенеративными нейронами.

Погрузите срезы в ацетон, чтобы обезвожить их, затем обработайте раствором щелочного серебра для стабилизации отложений серебра.

Инкубируйте секции в растворе восстановительной смеси, чтобы преобразовать связанные ионы серебра в металлические отложения серебра.

Промойте в уксусной кислоте, чтобы остановить реакцию.

Это выделяет дегенеративные нейроны на фоне неокрашенных здоровых нейронов.

Поместите пряди в мягкий отбеливающий агент, чтобы очистить фоновое серебро, затем промойте водой двойной дистилляции.

Затем ненадолго погрузите в сильный отбеливающий агент, чтобы удалить стойкие серебряные отложения с фона.

Добавьте стабилизирующий реагент для стабилизации серебряных отложений на нейронах, затем промойте водой двойной дистилляции. Наконец, обработайте фиксатором, чтобы навсегда закрепить пятно.

Более темные окрашенные участки указывают на дегенерацию нейронов.