JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 1:28 мин • March 4th, 2025
Соберите фиксированные участки мозга у мышей, инфицированных вирусом бешенства, с определенными посмертными интервалами.
Вирус поражает пирамидальные нейроны в коре головного мозга, а экспрессируемые вирусные белки локализуются в внутрицитоплазматических зернистых структурах, известных как тельца включения.
Обработайте срезы хлоридом аммония для нейтрализации реакционноспособных групп, индуцированных фиксацией, и минимизации фонового окрашивания.
Погрузите срезы в перекись водорода для инактивации эндогенной пероксидазы и снижения неспецифических сигналов.
Нанесите блокирующий раствор, содержащий моющее средство, для проникновения в клеточные мембраны и маскировки неспецифических участков связывания.
Инкубируйте с первичными антителами, специфичными к вирусным белкам.
Промойте и инкубируйте с биотин-конъюгированными вторичными антителами, которые связываются с первичными антителами.
Снова промойте и введите фермент пероксидазу-конъюгированный авидин, который связывается с биотином, а затем хромогенный субстрат, который фермент превращает в цветное изделие.
Визуализируйте иммунореактивные тела включения, содержащие вирусные белки, с помощью микроскопа.
С увеличением посмертного времени становится очевидной деградация нейронов и исчезновение тел включения.