Просвечивающая электронная микроскопия гранул липофусцина в нейронах

Начните с префиксной корковой ткани, в которой нейроны содержат гранулы липофуссцина. Эти богатые липидами гранулы накапливаются с возрастом и связаны с невропатологическими состояниями.

Обработайте ткани тетраоксидом осмия для стабилизации клеточных структур, в том числе липофусцином.

Обрабатывайте ткани возрастающими концентрациями этанола, чтобы обезвоживать их. Затем поместите его в смолу и вырежьте ультратонкие срезы, чтобы выявить нейронные структуры.

Установите секцию на медную сетку без покрытия.

Покрасьте участок уранилацетатом, морилкой тяжелого металла.

Ионы уранила взаимодействуют с клеточными биомолекулами, включая липиды, белки и ДНК.

Далее окрашивают ткань цитратом свинца, который слабо взаимодействует с предварительно связанными ионами уранила, усиливая контраст на фоне.

Поместите окрашенный срез под просвечивающий электронный микроскоп, чтобы подвергнуть его воздействию сфокусированного электронного пучка.

Окрашенные биомолекулы, обогащенные красителями тяжелых металлов, сильно рассеивают электроны по сравнению с фоном.

Гранулы липофусцина проявляются в виде неправильных, плотных кластеров на более светлом цитоплазматическом фоне, подтверждая их присутствие в нейро